Decoy Receptor 3遺伝子増幅は乳癌患者における再発を予測する

本論文は、乳房腫瘍が宿主の抗腫瘍免疫をどのように回避し得るかを扱い、特に、細胞傷害性リンパ球が腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する主要経路であるFas/Fas ligand（Fas/FasL）系に焦点を当てている。Decoy receptor 3（DcR3）はtumor necrosis factor receptor（TNFR）スーパーファミリーの一員で、Fasを介したアポトーシスを阻害し得ること、また複数の悪性腫瘍で増幅（amplified）および／または過剰発現（overexpressed）していると報告されている。先行研究では、乳房腫瘍ではDcR3の過剰発現は起こらないと示唆されており、さらにDcR3の状態と予後を結び付ける全体的な証拠は、がん種間で一貫していない。こうした背景のもと著者らは、乳がん細胞でDcR3 mRNAが発現しているか、DcR3のゲノム増幅（genomic amplification）が存在するか、そして遺伝子増幅が臨床病理学的変数と関連するかを明らかにすることを目的とした。中心的な目的は、根治切除（curative-intent resection）後の臨床転帰、特に無再発生存（recurrence-free survival: RFS）および全生存（overall survival: OS）を、DcR3遺伝子増幅が予測するかどうかを、手術治療を受けた乳がん患者の後ろ向きコホートで検証することであった。

乳がん組織でDcR3 mRNAが検出された。RNase protection assay（RPA）を行ったサブセットでは、検討した症例の50%（4/8）で顕著な発現が観察された。In situ hybridization（ISH）では、DcR3 mRNAシグナルは主として乳がん細胞に局在し、周囲の正常組織に限局した発現ではなく腫瘍細胞での発現を支持した。DcR3ゲノムDNAコピー数（定量PCR）はDcR3 mRNA発現と有意に相関し（ρ = 0.755, P = 0.0067）、コピー数が高いほどmRNA発現が強い傾向が示された。95例の乳がん組織におけるDcR3コピー数比の中央値は1.19で、著者らは遺伝子増幅を≥ 1.2（< 1.2を陰性）と定義した。非がん性乳腺組織（n = 12）の中央値は0.64と低かった。臨床的には、DcR3遺伝子増幅はリンパ管侵襲（lymphatic invasion）と関連した（P = 0.012）が、評価した他の臨床病理学的因子とは関連しなかった。予後に関しては、DcR3遺伝子増幅陽性は単変量解析でRFS不良を予測し（P = 0.0271）、多変量CoxモデルでもpStage（P < 0.001）と並んで独立した予測因子として残った（P = 0.028）。一方、DcR3増幅は単変量・多変量のいずれの解析でもOSとの有意な関連を示さなかった。これに対し、多変量モデルではpStage III（RR: 3.270; 95% CI: 1.162 - 9.200; P = 0.025）とER陽性（RR: 3.349; 95% CI: 1.061 - 10.577; P = 0.039）がOSの独立予測因子であった。

本研究は後ろ向き研究であり、1996年1月〜2000年12月に原発性乳がんで外科切除を受けた日本人患者95例（女性94例、男性1例；年齢中央値56歳、範囲30 - 87）を対象とした。遠隔転移のある4例と、術前化学療法後に残存腫瘍がなかった炎症性乳がん1例を除外した。手術方法は腫瘍の特徴により異なり（例：腫瘍径> 3 cmではmodified radical mastectomy、腫瘍径≤ 3 cmで広範な乳管内進展や多中心性病変がない場合は乳房温存術）、補助療法は72例に実施された（ホルモン療法、化学療法、または化学・ホルモン併用療法）。患者は3 - 6か月ごとにフォローされ、画像検査は年1回の定期実施とした。追跡期間は4〜105か月（中央値70）であった。分子解析は以下を含んだ：(i) RPAによりDcR3、Fas、FasLのmRNAを半定量（DcR3発現はDcR3/GAPDHのバンド濃度比> 3%と定義）；(ii) 凍結切片（cryostat sections）でのISHにより組織内のDcR3 mRNA局在を評価；(iii) パラフィン包埋切片からマイクロダイセクションしたゲノムDNAを用い、TaqMan定量PCRでβ-globinに対する相対値としてDcR3遺伝子コピー数を推定し、SW480を陽性対照とした。統計解析は、臨床病理学的変数との関連にFisherの正確確率検定、生存比較にKaplan–Meier法／log-rank検定、RFSおよびOSの独立予測因子の同定にステップワイズ選択を伴うCox比例ハザード回帰を用い、有意水準は両側P < 0.05とした。

本研究は、DcR3ゲノムDNA増幅が乳がんにおいて「重要な予後因子である可能性がある」と結論づけており、その主な根拠は、増幅状態が外科切除後の再発を独立して予測した点にある。著者らは、(1) 乳がん組織でDcR3 mRNAが検出され、かつがん細胞に局在すること、(2) DcR3コピー数とDcR3 mRNA発現の間に統計学的に有意な相関があることを示すことで、RNAベースの解析がより困難な保存パラフィン包埋検体において、ゲノム増幅が実用的な代替（surrogate）マーカーになり得ると主張している。臨床的な意義としては、DcR3遺伝子増幅が、既知の因子を超えてRFSに関する予後情報を追加し、多変量解析でpStageと並んで有意であり続けた点が挙げられる。しかし本論文は、このコホートにおいてDcR3増幅がOSの規定因子であることは示しておらず、著者らはRFSとOSの結果が分岐した理由を説明することが難しいと明記している。さらに、症例数の限界（95例）および／または有効な観察期間（議論の一部では中央値フォローアップがより長いにもかかわらず5年と記載）により、OSとの関連を検出する検出力が低下した可能性を示唆している。本研究は、乳がん患者において切除後の疾病再発の予測因子としてDcR3遺伝子増幅を示した最初の報告として提示されている。

著者らは、DcR3遺伝子増幅はより広範な予後研究に適していると提案している。これは、既治療患者のパラフィン包埋検体からゲノムDNAを容易に取得でき、転帰と結び付けた解析を、情報がよく整備されたコホートで実施できるためである。OSについては有意ではないものの示唆的な結果であったことから、DcR3増幅が全生存も予測するかどうかを判断するには、より多くの患者数および／またはより長い観察が必要になる可能性があるとしている。議論ではまた、DcR3増幅がリンパ管侵襲とは相関した一方でリンパ節転移（nodal status）とは相関しなかったという、未解決の生物学的／臨床的パターンが強調されており、著者らは現時点で説明が難しいと述べ、DcR3に関連する免疫回避がリンパ行性進展やリンパ節病変とどのように関係するのかを今後の研究で明らかにすべきだとしている。総じて本論文は、DcR3増幅を候補マーカーとして位置づけ、統計学的検出力と追跡期間が十分な拡大乳がんデータセットで検証・妥当性確認し、予後的意義の範囲を精緻化する必要があるとしている。

この研究は、乳がんが体の免疫の攻撃をどうやって逃れるのかを調べたものです。特に、免疫細胞ががん細胞を自滅させる仕組みの1つであるFas(細胞表面にある受容体で、FasLと結合すると細胞に自滅の合図を出します)とFasLの仕組みに注目しています。DcR3(免疫ががん細胞をアポトーシスに導く仕組みを弱める可能性がある分子で、がんが免疫から逃げることに関係すると考えられます)という分子は、この自滅の仕組みをじゃますることで、がん細胞が生き残るのを助ける可能性があると考えられています。DcR3は他のがんで増えたり（遺伝子が増える、または作られすぎる）、病気の進みやすさと関係するという報告がありますが、乳がんでははっきりしていませんでした。そこでこの研究では、乳がんでDcR3が作られているか、DcR3の遺伝子が増えているか、そしてそれが患者さんの経過（特に再発しにくさや生存）と関係するかを調べることを目的としました。

乳がんの組織でDcR3(免疫ががん細胞をアポトーシスに導く仕組みを弱める可能性がある分子で、がんが免疫から逃げることに関係すると考えられます)のmRNA(遺伝子の情報を元にタンパク質を作るための設計図の写しで、細胞がその遺伝子をどれだけ使っているかの手がかりになります)が見つかりました。mRNAを詳しく調べた一部の症例では、半分の症例でDcR3がはっきり作られていました。また、DcR3のmRNAは主に乳がん細胞の中で見つかり、周りの正常な組織では目立ちませんでした。
さらに、DcR3の遺伝子コピー数（同じ遺伝子が何個あるか）を調べると、コピー数が多いほどDcR3のmRNAも多いという関係が見られました。研究では、コピー数の比が1.2以上を「遺伝子増幅(ある遺伝子のコピー数が増えることです。コピーが増えると、その遺伝子の働きが強まりやすくなります)あり」としました。がんではこの値が高く、正常組織では低い傾向でした。
臨床的には、DcR3の遺伝子増幅がある人はリンパ管侵襲(がん細胞がリンパ管の中に入り込んでいる状態で、広がりやすさの目安の1つになります)が起きやすいことと関係していました。また、再発しないで過ごせる期間については、DcR3の遺伝子増幅があると再発しやすい傾向があり、他の条件を同時に考えても独立した予測因子として残りました。一方で、全体としての生存期間とのはっきりした関係は見つかりませんでした。

この研究は、過去の診療記録をさかのぼって調べる方法で行われました。対象は1996年から2000年に手術を受けた原発性乳がん患者95人です。遠隔転移がある人などは除外しました。手術方法や術後治療は患者さんの状態に応じて選ばれ、術後は定期的に通院して再発の有無を追跡しました。
検査としては、DcR3(免疫ががん細胞をアポトーシスに導く仕組みを弱める可能性がある分子で、がんが免疫から逃げることに関係すると考えられます)などのmRNA(遺伝子の情報を元にタンパク質を作るための設計図の写しで、細胞がその遺伝子をどれだけ使っているかの手がかりになります)を調べる方法、組織のどこでmRNAが見えるかを調べる方法、そしてパラフィン標本からDNAを取り出してDcR3の遺伝子コピー数を測る方法が使われました。再発や生存との関係は統計解析で評価しました。

この研究は、乳がんにおいてDcR3(免疫ががん細胞をアポトーシスに導く仕組みを弱める可能性がある分子で、がんが免疫から逃げることに関係すると考えられます)の遺伝子増幅(ある遺伝子のコピー数が増えることです。コピーが増えると、その遺伝子の働きが強まりやすくなります)が、手術後の再発を予測する目印になりうると示しました。特に、mRNA(遺伝子の情報を元にタンパク質を作るための設計図の写しで、細胞がその遺伝子をどれだけ使っているかの手がかりになります)を調べにくい保存標本でもDNAは調べやすいため、DcR3の遺伝子増幅を代わりの指標として使える可能性がある点が重要です。ただし、この研究ではDcR3の遺伝子増幅が生存期間そのものを左右するとは言い切れませんでした。症例数が多くないことや観察期間の問題で、生存への影響を見つけにくかった可能性もあると述べています。

著者らは、DcR3(免疫ががん細胞をアポトーシスに導く仕組みを弱める可能性がある分子で、がんが免疫から逃げることに関係すると考えられます)の遺伝子増幅(ある遺伝子のコピー数が増えることです。コピーが増えると、その遺伝子の働きが強まりやすくなります)は、より大きな集団で予後との関係を調べる研究に向いていると提案しています。理由は、過去の患者さんのパラフィン標本からDNAを取り出しやすく、経過情報と結びつけた検証がしやすいからです。今後は、より多くの患者さんやより長い追跡期間で、DcR3の遺伝子増幅が生存期間も予測できるのかを確かめる必要があります。また、リンパ管侵襲(がん細胞がリンパ管の中に入り込んでいる状態で、広がりやすさの目安の1つになります)とは関係するのにリンパ節転移(がんがリンパ管を通ってリンパ節に移動して増えることです)とは関係しにくい点についても、なぜそうなるのかを解明する研究が求められます。